Beta-Glucan Test
Produktinformationen
Der β-Glucan Test ist ein in-vitro diagnostischer Test für die quantitative Bestimmung von (1→3)-β-D-Glucan in Serum oder Plasma. Der Assay basiert auf LAL (Limulus Amöbozyten Lysat) Kaskadenreaktionen, welche durch eine kinetisch-turbidimetrische Methode gemessen werden.
Testprinzip
Endotoxin wird in der Probe durch Erhitzen auf 70°C für 10 Minuten in einer nicht-ionischen Detergenz und Polymyxin B enthaltenden Vorbehandlungslösung inaktiviert. Diese Vorbehandlung inaktiviert ebenfalls den weiteren Reaktionsablauf inhibierende Substanzen. Nach Zugabe der vorbehandelten Probe in das LAL-Reagenz aktiviert (1→3)-β-D-Glucan in der Probe den Faktor G, welcher wiederum die in Abb.1 dargestellte Reaktionskaskade initiiert. Die durch die Gelierungsreaktion ausgelöste Trübung wird als Transmissionsänderung detektiert. Die benötigte Zeit bis zum Erreichen eines gewissen Schwellenwertes der Trübung wird gemessen. Dieses Intervall ist als Zeit bis zur Gelierung („Time to gelation – Tg“; Abb. 2) definiert. Der Logarithmus (log) der β-Glucan-Konzentration ist invers proportional zum Logarithmus von [log(Tg)]. Durch die Messung der Zeit bis zur Gelierung (Tg) bei einer unbekannten Probe, kann die β-Glucan-Konzentration über eine Standardkurve ermittelt werden.
Abb. 1 (links): Kaskadenreaktionen LAL
Abb. 2 (rechts): Prinzip kinetisch-turbidimetrische Methode
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Testverfahren
1. Vorbehandlung
0,1 ml Plasma oder Serum werden zu 0,9 ml Vorbehandlungslösung gegeben. Nach Mischen wird die Probe auf 10 Minuten lang auf 70°C erhitzt und anschließend auf Eis abgekühlt.
Abb. 3: Vorbehandlungsverfahren
2. Messung
0,2 ml der vorbehandelten Probe werden in das Röhrchen mit LAL-Reagenz überführt. Nach dem Mischen erfolgt das Einsetzen in den LIMUSAVE MT-7500 oder Toxinometer MT-6500. Die Messung startet sofort und benötigt 90 Minuten.
Abb. 4: Messverfahren
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